一、LDLR基因敲除（KO）小鼠模型

1. 構(gòu)建方法

• 通過(guò)CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)敲除小鼠的Ldlr基因，使其無(wú)法表達(dá)功能性LDLR蛋白。例如：

• 集萃藥康構(gòu)建的Ldlr KO小鼠模型，在正常飲食下血漿膽固醇水平為野生型的兩倍，高脂飲食后可達(dá)2000mg/dL以上。

• 唯尚立德開發(fā)的Ldlr敲除小鼠（品系編號(hào)VSM40002），通過(guò)破壞exon4導(dǎo)致LDLR蛋白缺失。

2. 表型特征

• 高膽固醇血癥：Ldlr KO小鼠血漿總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）顯著升高，尤其在西方飲食誘導(dǎo)下，LDL-C水平急劇上升。

• 動(dòng)脈粥樣硬化：高脂飲食后，主動(dòng)脈出現(xiàn)脂質(zhì)沉積和早期動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。例如，油紅O染色顯示Ldlr KO小鼠主動(dòng)脈周圍大量紅色脂質(zhì)沉積。

• 其他疾病研究：如糖尿病腎病、高血糖相關(guān)研究。

3. 應(yīng)用領(lǐng)域

• 機(jī)制研究：用于探究LDLR在膽固醇代謝、動(dòng)脈粥樣硬化形成中的作用。例如，結(jié)合骨髓移植實(shí)驗(yàn)（如β7?/?嵌合體模型），研究免疫細(xì)胞對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的影響。

• 藥物評(píng)價(jià)：驗(yàn)證藥物如MGL-3196對(duì)高脂血癥的改善效果，或評(píng)估他汀類藥物與PCSK9抑制劑的協(xié)同作用（如延長(zhǎng)LDLR壽命）。

二、LDLR點(diǎn)突變模型

1. 構(gòu)建與功能

• 通過(guò)引入特定突變（如終止密碼子）模擬人類致病性變異。例如：

• LDLR^T2885點(diǎn)突變模型：導(dǎo)致LDLR蛋白表達(dá)顯著降低，Western Blot和免疫熒光驗(yàn)證了蛋白缺失。
  

• Ldlr-E208X突變小鼠：模擬人類E207X突變，證實(shí)其與高膽固醇血癥及動(dòng)脈粥樣硬化的因果關(guān)系。

2. 應(yīng)用

• 致病機(jī)制研究：揭示突變?nèi)绾斡绊慙DLR功能，例如配體結(jié)合或再循環(huán)障礙。

• 精準(zhǔn)治療開發(fā)：為基因療法提供靶點(diǎn)驗(yàn)證模型。

三、計(jì)算機(jī)模型：OptiMo-LDLr

1. 模型特點(diǎn)

• 整合多工具預(yù)測(cè)：結(jié)合Polyphen-2、SIFT、REVEL等六種軟件，優(yōu)化致病性預(yù)測(cè)。

• 高準(zhǔn)確性：特異性達(dá)96.71%，敏感性達(dá)98.36%，優(yōu)于單一工具。
  

熱點(diǎn)殘基分析：識(shí)別LDLR中易致病的“熱點(diǎn)區(qū)域"，如特定結(jié)構(gòu)域或外顯子。

1. 應(yīng)用

• 臨床診斷支持：輔助分類ClinVar數(shù)據(jù)庫(kù)中未明確致病性的LDLR變異。

• 結(jié)構(gòu)功能關(guān)聯(lián)：通過(guò)3D映射揭示致病性殘基的聚集區(qū)域，推測(cè)其與配體結(jié)合或降解相關(guān)。

四、外泌體介導(dǎo)的基因治療模型

1. 技術(shù)原理

• 將Ldlr mRNA封裝于外泌體中遞送至Ldlr?/?小鼠，恢復(fù)LDLR表達(dá)。

2. 療效與優(yōu)勢(shì)

• 逆轉(zhuǎn)表型：改善高膽固醇血癥、動(dòng)脈粥樣硬化和肝脂肪變性。

• 穩(wěn)定性與安全性：避免免疫反應(yīng)，提高mRNA穩(wěn)定性。

五、其他相關(guān)模型

1. 細(xì)胞模型：如研究APOE與LDLR相互作用時(shí)，使用敲除LDLR的細(xì)胞系驗(yàn)證攝取機(jī)制。

2. 人源化模型：如動(dòng)脈粥樣硬化靶標(biāo)人源化小鼠，用于更貼近人類疾病的研究。

總結(jié)

LDLR模型涵蓋基因敲除動(dòng)物、點(diǎn)突變模型、計(jì)算預(yù)測(cè)工具及基因治療平臺(tái)，廣泛應(yīng)用于疾病機(jī)制解析、藥物篩選和臨床診斷。不同模型各有側(cè)重，例如：

• 動(dòng)物模型（如Ldlr KO小鼠）直接模擬病理表型；

• OptiMo-LDLr助力致病性變異分類；

• 外泌體治療模型為遺傳性高膽固醇血癥提供新療法思路。