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上海Tunel檢測實驗的原理: 細胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內切酶，這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發(fā)現180-200bp的DNA ladder......
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上海Tunel檢測實驗
上海Tunel檢測實驗的原理:
細胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內切酶，這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發(fā)現180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素 (FITC) 標記的dUTP (fluorescein-dUTP) ，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測，這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測細胞凋亡的原理。
TUNEL檢測（石蠟切片） | 取下適當的新鮮的組織塊固定于4%-10%濃度的多聚甲醛或中性甲醛中，甲醛與組織塊體積比在10:1和20:1之間，4攝氏度保存運輸； |
TUNEL檢測（冰凍切片） | 取下的新鮮組織應立即放入超低溫冰箱或者液氮中，用干冰運輸，固定好的切片應于-80或者-20度保存，并盡快用于檢測； |
TUNEL檢測（細胞爬片） | 細胞爬片4%多聚甲醛4度固定30min，換PBS緩沖液4度保存運輸，盡快用于檢測； |
熒光法需要先拍一張凋亡熒光圖，再拍一張原位染核圖，再合并圖層，終我們提供的為三張熒光圖片。
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